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使用 Arium超純水系統(tǒng) 最大限度地減少 LCMS干擾

點擊次數(shù):589  更新時間:2024-05-31

LC-MS輕松拿捏,實驗“水到渠成"


生物制藥領(lǐng)域,尤其是在研發(fā)和生產(chǎn)上游階段,精確和可靠性是實驗成功的關(guān)鍵。從細胞培養(yǎng)到抗體藥物的生產(chǎn),每一個步驟都對實驗條件有Ji高的要求。在這些過程中,實驗用水的純凈度尤其重要,因為它直接影響到實驗的結(jié)果。


在生物制藥的上游實驗室中,通常會進行多種關(guān)鍵實驗,比如細胞培養(yǎng)、分子生物學(xué)實驗和蛋白質(zhì)純化和分析,這些實驗對純水都有不同程度的要求,水中的任何雜質(zhì),如有機物、DNA酶、離子等都可能對實驗結(jié)果產(chǎn)生負面影響:


細胞培養(yǎng)


水中的有機污染物可以作為外源性生長因子或抑制劑,影響細胞的代謝和生長動態(tài)

分子生物實驗


微量的DNA或RNA污染可以引起PCR實驗中的非特異性擴增,從而影響實驗結(jié)果的準確性和重復(fù)性

蛋白質(zhì)純化和分析


水中污染離子可以與蛋白質(zhì)相互作用,改變其電荷狀態(tài),影響蛋白質(zhì)的分離和鑒定

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分析設(shè)備對實驗室水質(zhì)有較高要求

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(LC-MS)是生物制藥實驗室中常用的分析設(shè)備,其實驗中對水質(zhì)的要求尤其嚴格。低質(zhì)量的水可能引入背景噪音,干擾色譜和質(zhì)譜的讀數(shù),影響數(shù)據(jù)的準確性和重復(fù)性。

有機化合物的影響


1


靈敏度降低:有機化合物與分析物競爭固定相的活性位點,降低分析物的保留量,降低方法的靈敏度

2


假峰和分離干擾:有機化合物的堆積可導(dǎo)致假峰的產(chǎn)生,干擾色譜分離過程

3


影響分析準確度:污染物長期積聚形成新的固定相,導(dǎo)致峰拖尾和保留時間的變化

細菌和生物膜污染


1


色譜柱易堵塞:由細菌和生物膜殘留物引起,影響流動相的流動性和色譜性能

2


結(jié)果受干:細菌產(chǎn)生的有機副產(chǎn)物如熱原和酶類,可導(dǎo)致色譜結(jié)果的干擾

無機污染的影響


1


背景噪音增加:例如堿離子的過量存在可能改變分析結(jié)果,增加背景噪音

2


影響分離度:水中的離子污染物可能改變?nèi)芤旱碾x子強度,進而影響色譜分離的特性,包括電導(dǎo)率和溶液的化學(xué)物理性質(zhì)






在本次應(yīng)用案例中,使用賽多利斯Arium® Mini UV超純水系統(tǒng)處理的水在LCMS分析中表現(xiàn)出色。與市售的瓶裝LCMS級水和設(shè)施中的去離子水相比,Arium® 水能顯著降低背景水平,提高分析靈敏度,結(jié)果更為精確和一致。

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實驗結(jié)果



提供高質(zhì)量的色譜分析用水

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圖1:總離子色譜圖(TIC;1;TOF MS(400-7,000),95 V ESI+),質(zhì)譜數(shù)據(jù)(2;平均時間2.1751 min,TOF MS(400-7,000),95 V ESI+:組合)來自單克隆抗體樣品和紫外線痕跡(3;通道名稱:TUV 280)

所用系統(tǒng)為:配備有BioResolve™RP mAb Polyphenyl色譜柱的Waters BioAccord™ LCMS

    在實驗中,比較了全新打開的LCMS級瓶裝水、Arium® 水和內(nèi)部設(shè)施去離子(DI)水的性能。LCMS級和Arium® 水表現(xiàn)出了類似的高質(zhì)量色譜圖,證明它們適合進行精確的LCMS分析。相比之下,去離子水的色譜圖顯示出較高的背景水平和微小的峰面積差異,暗示該水源可能含有雜質(zhì)如總有機碳(TOC)、無機物和細菌,這可能影響分析的準確性和可靠性。

    考慮到LCMS級瓶裝水一旦瓶裝水被打開,其水質(zhì)可能會因多種因素而下降,這需要在實驗設(shè)計和操作中特別考慮,同時成本也是考量的一大因素。



    Arium® 純水讓上游實驗中的樣本分析結(jié)果更清晰




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    圖2:總離子色譜圖(TIC;1,TOF MS(400–7,000),95 V ESI+)和用Arium®-水制備的單克隆抗體樣品的質(zhì)譜圖(平均時間2.1418分鐘(UV3)和2.1668分鐘(PERF),2,TOF MS(400–7,000),95 V ESI+:組合)。

    賽多利斯Arium® 實驗室純水的具備*性能和可靠性,已被廣泛應(yīng)用于上游實驗室的LCMS應(yīng)用中。圖2展示了從生物反應(yīng)器內(nèi)和灌注液路線(PERF)采集的CHO細胞培養(yǎng)物樣本的完整質(zhì)量分析結(jié)果。可以清楚地觀察到兩個樣本中糖型豐度的微小差異,以及較低的背景噪音,這些特點使得分析結(jié)果更加清晰和容易解讀。

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    結(jié)論

    在追求高質(zhì)量生物制藥研究和生產(chǎn)過程中,選擇合適的實驗材料和條件是成功的關(guān)鍵。Arium® 系列超純水系統(tǒng)提供的高標準純水,為生物制藥上游的各種實驗提供了強有力的支持,可以獲得更優(yōu)的色譜性能,同時提高了實驗的準確性和效率。

    選擇高質(zhì)量的純水系統(tǒng),是確保生物制藥研發(fā)精準高效的明智選擇。


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